科技日?qǐng)?bào)記者 王延斌 通訊員 翟榮惠
將一片西紅柿葉子在滴管里擠出汁液，并適當(dāng)加水稀釋，然后輕輕放入一片試紙條，大約10秒之后，該紙條上清晰地出現(xiàn)了兩道暗紅色的橫條，這是該葉子感染了番茄褐色皺果病毒（tomatobrownrugosefruitvirus，簡(jiǎn)稱ToBRFV）的標(biāo)志。
番茄褐色皺果病毒試紙條 受訪者供圖
這一幕是在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病毒學(xué)研究室發(fā)生的。近日，科技日?qǐng)?bào)記者來(lái)到該實(shí)驗(yàn)室時(shí)，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、植物病毒學(xué)專家李向東教授告訴記者：“這是我們實(shí)驗(yàn)室剛剛制備的番茄褐色皺果病毒試紙條。相對(duì)于其它檢測(cè)手段，它靈敏度高、特異性強(qiáng)、使用方便、操作簡(jiǎn)單，非常適合田間大批量樣品檢測(cè)，對(duì)病毒的精準(zhǔn)監(jiān)測(cè)及早期預(yù)警有重要作用?！?/p>
番茄褐色皺果病毒是一種新發(fā)病毒，可通過(guò)種子、接觸以及熊蜂傳播，嚴(yán)重威脅番茄的安全生產(chǎn)。ToBRFV首先報(bào)道于約旦、以色列，隨后相繼在美洲、歐洲、非洲等國(guó)家出現(xiàn)，引起國(guó)際上廣泛重視，多個(gè)國(guó)家將其列入檢疫對(duì)象。
今年4月9日，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和海關(guān)總署聯(lián)合發(fā)布的《中華人民共和國(guó)進(jìn)境植物檢疫性有害生物名錄》也將ToBRFV列為檢疫對(duì)象。
快速鑒定及早期預(yù)警對(duì)ToBRFV的防治十分關(guān)鍵。目前的ToBRFV檢測(cè)方法包括多重PCR、熒光定量等，均需要精密儀器或?qū)I(yè)的操作人員。而李向東實(shí)驗(yàn)室研制的膠體金免疫試紙條操作簡(jiǎn)單，可在幾秒或者幾分鐘內(nèi)通過(guò)肉眼觀察進(jìn)行判斷，對(duì)于田間檢測(cè)十分適用。
據(jù)李向東介紹，他們實(shí)驗(yàn)室以ToBRFV粒子為免疫原，通過(guò)雜交瘤技術(shù)制備了17株抗ToBRFV的單抗，將2個(gè)單抗分別固定于膠體金墊和硝酸纖維素膜上進(jìn)行組合，制備膠體金試紙條，獲得272個(gè)配對(duì)組合。通過(guò)特異性測(cè)定，篩選到一組配對(duì)抗體制備的試紙條。試紙條可從稀釋12800倍的番茄葉片病汁液中（含約8微克番茄葉片）檢測(cè)到ToBRFV，快速而且靈敏，而與其它同屬煙草花葉病毒屬、氨基酸一致率超過(guò)85%、同樣侵染番茄的番茄斑駁花葉病毒、番茄花葉病毒等毫無(wú)反應(yīng)。
“我們同時(shí)在辣椒上做了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果同樣理想。目前，該成果已經(jīng)申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專利，并被山東、河北、河南、江蘇、安徽等地農(nóng)技推廣部門和企業(yè)試用?！崩钕驏|說(shuō)。
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