DNA分子克隆技術是分子生物學研究的基礎，其創(chuàng)新和發(fā)展直接推動著分子生物學的進步。目前國內(nèi)外使用的分子克隆方法有多種，各有優(yōu)缺點，分子克隆領域尚未形成一種標準化的方法，且試劑盒價格昂貴。中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院研究人員日前開發(fā)了一種新型的實用分子克隆技術Nimble Cloning(簡稱NC克隆技術)，能將目標DNA通過一步反應直接克隆到環(huán)狀目標載體。
該技術論文近期發(fā)表在國際期刊《生物工程與生物技術前沿》(Frontiers in Bioengineering and Biotechnology)，中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院生物所言普副研究員和周鵬研究員為該文通訊作者。
言普介紹，NC克隆技術與現(xiàn)有分子克隆技術相比，具有以下優(yōu)點：一是直接將DNA克隆到環(huán)狀載體，避免了載體的線性化酶切和回收等步驟，不僅簡化了實驗操作，還提高了克隆效率。二是使用靈活，用途廣泛?；驍U增技術(PCR)產(chǎn)物和環(huán)狀質(zhì)粒上的DNA均可克隆到目標載體，并且可用于單片段、多片段和多位點等多種形式的克隆。三是可靈活用于標準化克隆和無縫克隆?；蚣訋ㄓ媒宇^序列后可克隆到系統(tǒng)任何一個載體，形成一個標準化的克隆系統(tǒng)。如有不使用通用接頭序列的無縫克隆要求，只需將目標基因與載體的重疊序列設計在通用接頭的外圍，通用接頭可在克隆反應中消除，在不改變載體的情況下實現(xiàn)無縫克隆。
為了方便NC克隆技術的推廣使用，言普等還構(gòu)建了一系列配套的系統(tǒng)表達載體，包括原核表達、酵母雙雜交、植物過表達、植物RNAi、植物亞細胞定位、植物BiFC、植物基因編輯、植物VIGS、哺乳動物表達載體等，初步形成了一個標準化的克隆系統(tǒng)，為基因功能研究提供了一個便利的技術平臺。該套載體向科研人員開放共享，可免費索取使用。
據(jù)悉，該技術已在中科院華南植物園、華南農(nóng)業(yè)大學、華中農(nóng)業(yè)大學、四川農(nóng)業(yè)大學、東北林業(yè)大學、西北工業(yè)大學、揚州大學、海南大學等10多家科研單位使用，取得了良好的使用效果，有望成為分子克隆領域的標準系統(tǒng)。(王祝華)
關鍵詞： 克隆技術
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